问：什么是Air Cooling功能？

答：带Air Cooling功能的型号在底部具有风扇，能促进空气快速的流通，及时排出处理样品过程中产生的热量。正常情况下，不带风冷功能的Bullet Blender处理一次样品，仪器内部温度会升高5摄氏度左右，如果不同批次样品连续处理，由于仪器内部热量得累积效应，使得温度升高较多，Air Cooling功能可以及时将产生的热量排出仪器，保持仪器内部和环境温度接近。如果将Bullet Blender放在冷藏柜中运行，可以保证样品一直处于较低温度。

问：在Bullet Blender上可以使用什么类型的样品管？

答：Bullet Blender和Bullet Blender Blue可以使用1.5 mL、1.7 mL和 2.0 mL尖底或圆底高质量聚丙烯微量离心管。不同形状的离心管处理效果会有细微的差异，推荐使用Eppendorf Safe-Lock 1.5 mL微量离心管（订货号：0030 120.086）。Bullet Blender也可以使用带旋盖的1.5 mL微量离心管，需要更换配件已达到1.5 mL普通离心管和1.5 mL带旋盖离心管的互换。

问：怎样在Bullet Blender上设置混合、破碎或均质模式？

答：可以调节转子转速和处理周期来达到不同的处理目的。当对坚硬样品进行均质时，需要将速度设置到最大，处理周期也会相应延长。如果是对样品进行混合，在较低转速就可实现。

问：操作Bullet Blender是否方便？

答：只需将装有样品、研磨珠和缓冲液的离心管放在支架上，盖上上盖，设置处理速度和周期，按Start键即可，所有的样品会同时处理完毕。

问：离心管中样品量应该为多少比较合适？

答：对于1.5或2.0ml的样品管，推荐使用50-300毫克样品。少于50毫克也能处理，只是需要增大研磨珠和样品之间的质量比，大于300毫克的样品也可以处理，但前提是保证样品和研磨珠在样品管内能有较大自由活动的空间，如果样品+研磨珠+缓冲液的体积超过样品管容量的75%，样品的破碎效率会受到较大影响。

问：处理多个样品时是否需要对样品管进行平衡？

答：不需要，样品管放在哪个孔内没有限制，如果样品管少，尽量将样品管均匀间隔放置即可。

问：是否可以对液氮冷冻过的样品进行处理？

答：可以，将液氮冷冻过的样品放入低温缓冲液使其解冻，然后就可以进行正常操作了。如果样品在冷冻之前是脱水干燥的，可以直接对样品进行处理（在样品管内只加入样品和研磨珠，不加缓冲液），处理一段时间后再加入低温缓冲液，再处理一遍，可以得到很好的效果。不能直接处理冷冻的大块湿态样品，否则破碎效率会不理想。

注：如果要破碎经液氮处理过的样品，务必使用Eppendorf 1.5mL Safe-Lock微量离心管（订货号：0030 120.086）。

问：我需要处理的样品对温度比较敏感，处理过程中要求温度不超过10度，怎么满足要求？

答：现在Bullet Blender的所有型号都不带强制制冷功能，如果处理过程中对温度要求较高，可以考虑以下方法。提前15分钟，将Bullet Blender放入不低于4度的冷藏柜，然后将样品、研磨珠和提取缓冲液加入到样品管以后，将整个样品管放入冰箱（低于-20度，如果温度低于-30度，请使用质量较好的样品管）冷冻一段时间，待管内液体冻结实后，直接放入Bullet Blender进行处理，冰块融化的同时，研磨珠对样品进行破碎，这样可以保证样品一直处于低温状态。

问：怎样从样品管中回收样品？

答：只需要进行低速离心将研磨珠和无用的组织细胞碎片浓缩在管底，然后吸取上清液，即可进行后续提取。提取DNA时，氯仿抽提以及之前的步骤都可以在最初的样品管中进行。

问：各种研磨珠（玻璃、硅酸锆、氧化锆和不锈钢）之间的区别是什么？

答：不同的样品需要不同材质的研磨珠，玻璃、硅酸锆、氧化锆和不锈钢之间最重要的区别是密度不同。玻璃的密度最低，硅酸锆、氧化锆和不锈钢的密度分别是玻璃的1.5、2.2和3.2倍。玻璃适合处理密度较低的样品，硅酸锆和氧化锆适合处理中等密度的样品，不锈钢适合处理高密度的样品。玻璃、硅酸锆和氧化锆研磨珠较稳定，不易和样品或缓冲液中的物质发生反应，不锈钢研磨珠研磨过程中会产生金属离子，可能会和样品或缓冲液中的物质发生反应，影响后续实验。绝大多数样品选择氧化锆研磨珠可以得到满意的效果。

问：应该选择什么样的研磨珠？

答：选择研磨珠最基本的两条原则是：（1）越坚硬的样品使用密度越大的研磨珠；（2）使用和样品细胞大小相当的研磨珠，以保证研磨珠和样品的充分接触，比如：破碎细菌使用0.1mm的玻璃研磨珠即可，破碎大块组织使用1mm以上不锈钢或氧化锆研磨珠。为了得到更好的处理效果，通常可以对大小尺寸研磨珠进行组合，大尺寸的研磨珠将组织打碎或增加小尺寸研磨珠的撞击力度，小尺寸的研磨珠进一步将细胞或细胞团破碎。

问：我曾经使用其它品牌的研磨珠型破碎仪，我是否可以在Bullet Blender上使用相同的实验方案？

答：不行。和市场上其它产品的原理有所不同，Bullet Blender使用专利的击打技术，使得Bullet Blender的破碎效率更高而产热更小。用户可以参考我们针对不同样品的推荐方案或自己对实验方案进行优化。

问：是否可以重复利用研磨珠？

答：可以，1mm以上的研磨珠都较容易回收，可以多次重复利用。直径小于1mm的研磨珠，不易回收，建议一次性使用。

问：研磨珠可以重复使用多少次？

答：研磨珠重复使用次数并没有限制，研磨珠的磨损程度视样品坚硬程度、设置处理速度和处理周期而定，一般情况下，氧化锆研磨珠可以重复使用20次以上。

问：怎么清洗研磨珠？

答：使用实验室常用清洁剂就行，用去离子水多次润洗，确保在干燥研磨珠之前没有残留泡沫。玻璃研磨珠也可以使用浓盐酸清洗。但盐酸会和氧化锆研磨珠表面，产生具有活性的陶瓷中间产物，可能会干扰后续实验。所以我们不建议使用酸液清洗硅酸锆或氧化锆研磨珠，也不建议用酸液清洗不锈钢研磨珠。

问：提取RNA 需要注意什么问题？

答：RNA提取前对样品进行破碎，最重要的是去除RNA酶的干扰，需要使用RNase Zap®（Ambion, Inc.）或RNase Away®（Molecular BioProducts）处理研磨珠和样品管，然后使用无核酸酶的纯净水润洗，最后进行高压灭菌。如果没有去RNA酶的试剂，也可以将研磨珠在232℃烘烤2小时以上，即可去活RNA酶。

问：怎么对研磨珠进行灭菌？

答：可以对研磨珠进行高压湿热灭菌或干热灭菌。灭菌后研磨珠可能会粘连在一块，只需要轻摇就可以将粘连的研磨珠分开。另外也可以使用伽马射线或环氧乙烷灭菌。

问：针对实际样品如何选择研磨珠？

答：请参考网站研磨珠选择指南。基本原则是：为了使样品和研磨珠之间的作用最大化，使用和样品规格相当的研磨珠，越坚韧的样品使用密度越大的研磨珠。针对样品的特征和提取的需要，可以使用2-3种不同规格的研磨珠进行组合，可以得到更好的处理效果。

问：样品在处理过程中，样品管是否会经常出现破裂的现象？

答：如果使用高质量的聚丙烯离心管，在有效的处理时间内，不会出现破裂的现象。当需要使用液氮冷冻样品管时，务必使用Eppendorf 的1.5mL Safe-Lock微量离心管（订货号：0030 120.086）。

问：有些样品比较轻，容易漂浮在缓冲液面上，处理效果不佳，是否有解决办法？

答：使用移液器吸头尽量将样品推至管底，然后加入研磨珠，两者比例可以增至3:1—4:1，最后加入缓冲液。或者在样品管中只加入样品和研磨珠，然后将试管放入液氮冷冻20秒钟，然后直接放入Bullet Blender中进行处理。

问：组织含有大量纤维，韧性太强，破碎效果不好怎么办？

答：样品中的大量纤维的确会影响破碎效果，一方面可以使用密度更大的研磨珠，减少样品量，同时增加处理时间和速度；另一方面可以将样品经过液氮处理，在样品管中只加入样品和研磨珠，然后将试管放入液氮冷冻20秒钟，让纤维组织变脆，然后直接放入Bullet Blender中进行处理，会得到更好的效果。

问：样品管在处理过程中管盖密封不严，容易漏液，怎么办？

答：对于质量比较差的离心管，的确存在管盖密封不严，处理过程中出现漏液的情况。我们推荐使用Eppendorf 的1.5mL Safe-Lock微量离心管（订货号：0030 120.086），该离心管的带钩管盖，可防止管盖意外打开。

问：样品太坚硬不易破碎怎么办？

答：对于一些特别坚硬的样品，如：硬骨骼、软骨、指甲、鱼鳞、种子等，在破碎之前可以使用液氮进行预处理，使样品变脆后更易处理，见前面问题7。

问：我在使用试剂盒提取样品中的核酸和蛋白，一些试剂盒要求使用的缓冲液量和Bullet Blender推荐的使用量不同，该怎么办？

答：如果您使用的试剂盒要求使用的缓冲液量比Bullet Blender推荐使用的量多，可以先使用Bullet Blender推荐的量，待样品处理完后再将余下的缓冲液加入样品管。如果您使用的试剂盒要求使用的缓冲液量比Bullet Blender推荐使用的量少，使用Bullet Blender推荐的量或将试剂盒的缓冲液进行稀释以达到Bullet Blender推荐的量。如果使用液氮预处理样品，就不需提前加入缓冲液，缓冲液的加入量就可以严格按照试剂盒要求的量进行。