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GBfectene-Elite高效转染试剂
 

完全和lipo2000媲美的高效转染试剂

----GBfectene-Elite

 

GBfectene-Elite转染试剂是一种新型的真核细胞转染试剂。该试剂可与DNA形成稳定的复合物,保护DNA免受降解,从而高效地将DNA转染至真核细胞中。它不但适用于多种常用类型的细胞系,也适合一些难转染的细胞,如 Jurkat 和 RAW264.7 等。与其它转染试剂相比,GBfectene-Elite转染试剂转染效率高、细胞存活率高,毒性小,广泛用于瞬时和稳定转染, 也可以应用于蛋白表达和基因功能的研究。

 
特点
 
 转染效率高
 蛋白表达水平高
 毒性低,可用于原代细胞转染

 操作简便,转染后无介质变化要求

适用范围
    

将外源DNA分子导入真核细胞已成为研究和控制细胞内基因表达的重要工具,它可用于生化特性、突变分析以及细胞生长行为的研究。此外,还被广泛应用于研究疾病的分子致病机制,包括遗传与环境因子的复杂互作、新药研究、基因诊断,疫苗及保健品的开发等。

 

操作流程
  以下操作步骤以24孔板为例,遵循以下操作方法可以高效地将DNA转染贴壁和悬浮培养的多种真核细胞。但是对某些特殊的细胞系和培养条件,或特殊应用等,也许需要单独特别优化,请参考表一至表三。
A. 细胞铺板
 
  贴壁细胞数量:转染前的18-24个小时,在24孔板的每个孔中加入500 μl含有0.6-1.3 x 105个细胞的无抗生素生长培养基(确保转染时细胞密度在70-80%)。
悬浮细胞数量: 转染实验的当天,在24孔板的每个孔中加入500 μl含有1-2.5 x 105个细胞的无抗生素生长培养基。注意确保转染时细胞没有过度生长或处于休止期。
 
B. DNA/GBfectene-Elite转染复合物的制备
 
 

1、将GBfectene-Elite转染试剂放置于室温中,使用前轻轻混匀。
2、将100 μl DMEM或其他培养液(无血清和无抗生素)加入无菌试管中。 
3、在上述含有DMEM培养液的试管中加入0.5 μg 或1 μg待转染的DNA质粒等,并充分混匀。随后在管子中加入经优化实验得到的GBfectene-Elite 最佳用量(见重要提示4),快速涡旋混合使其完全混匀。  
4、室温静置10分钟,从而获得100 μl DNA/GBfectene-Elite 转染复合物(注:该转染复合物在室温下可保质1 小时)。

 
C转染过程
 
  1、在每个细胞培养孔不同部位逐滴加入100 μl DNA/GBfectene-Elite的转染复合物(由步骤B制备所得),轻轻前后晃动培养板使其混匀。
2、放置在37 ℃,5%CO2培养箱中培养。
3、转染24-48小时后,收集细胞,并按要求进行检测。
图一:GBfectene-Elite转染试剂的操作流程
 

   
表一: 贴壁细胞或悬浮细胞接种数量、培养基体积
 
培养器皿 每孔表面积(cm2) 每孔相对面积 (vs. 96-孔板) 每孔培养基的体积 (ml) 贴壁细胞在转染前一天接种密度 悬浮细胞在转染
当天接种密度1
96-孔板 0.32 1X 0.1 1 - 2x104 2 - 5x104
48-孔板 0.75 2.3X 0.2 2 - 5x104 0.4 - 1x105
24-孔板 2 6.3X 0.5 0.6 - 1.3x105 1 - 2.5x105
12-孔板 4 13X 1 1.3 - 2.6x105 2 - 5x105
6-孔板 9.5 30X 2 3 - 6x105 0.4 - 1x106
60 mm 21 66X 5 0.6 - 1.3x106 1 - 2.5x106
100 mm 56  175X 10 1.8 - 3.5x106 2 - 5x106
  注1:贴壁细胞培养密度取决于培养器皿的表面积,而悬浮细胞的密度则由培养基体积决定,确保转染时细胞密度在70-80%
   
表二: 对常规和敏感细胞起始转染条件
 
养器皿 每孔中培养基的体积 (ml) 转染复合物中 DNA含量范围(µg) 转染稀释液(无血清DMEM) 体积(µl)

常规细胞每孔转染试剂用量范围 (µl)2

96-孔板 0.1 0.1 20 0.3 - 0.6
48-孔板 0.2 0.2 40 0.6 - 1.2
24-孔板 0.5 0.5-1 100 1.5 - 3.0
12-孔板 1 1-2 200 3.0 - 6.0
6-孔板 2 2-4 400 6.0 - 12
60 mm 5 5-10 1000 15 - 30
100 mm 10 10-20 2000 30 - 60
   注2:GBfectene-Elite转染试剂的用量在此范围内优化 
   
表三: 使用 GBfectene-Elite成功进行细胞转染的范例
 
细胞类型 24孔板接种密度 每孔培基体积 (ml) 转染复合物中DNA含量 (μg) 转染稀释液(无血清DMEM) 体积(µl) GBfectene-Elite用量范围(µl)3
HEK293 293T 1.3x105 0.5 0.5 100 2.0-3.0
CHO-K1 0.9x105 0.5 0.5 100 1.5-2.5 
COS-7 1x105 0.5 0.5 100 1.5-2.5
Hela 0.9x105 0.5 0.5 100 1.5-2.0
HepG2 0.9x105 0.5 1.0  100 2.0-3.0
MCF-7 1.2x105 0.5 0.5 100 2.0-2.5 
NIH3T3 0.9x105 0.5 1.0 100 2.5-3.0
RAW264.7 1.5x105 0.5 1.0 100 1.5-2.5
 

  注3: 如果在转染后发现细胞毒性,减少GBfectene-Elite转染试剂的用量

编号 名称 规格 产品价格(RMB
GB1001-750 GBfectene -Elite 转染试剂 0.75ml 1700
GB1001-1500 GBfectene -Elite 转染试剂 1.5ml 2800


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