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转染效率高 |
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蛋白表达水平高 |
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毒性低，可用于原代细胞转染 |
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操作简便，转染后无介质变化要求 | | |
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将外源DNA分子导入真核细胞已成为研究和控制细胞内基因表达的重要工具，它可用于生化特性、突变分析以及细胞生长行为的研究。此外，还被广泛应用于研究疾病的分子致病机制，包括遗传与环境因子的复杂互作、新药研究、基因诊断，疫苗及保健品的开发等。 |
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以下操作步骤以24孔板为例，遵循以下操作方法可以高效地将DNA转染贴壁和悬浮培养的多种真核细胞。但是对某些特殊的细胞系和培养条件，或特殊应用等，也许需要单独特别优化，请参考表一至表三。 | |
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贴壁细胞数量：转染前的18-24个小时，在24孔板的每个孔中加入500 μl含有0.6-1.3 x 105个细胞的无抗生素生长培养基(确保转染时细胞密度在70-80%)。
悬浮细胞数量： 转染实验的当天，在24孔板的每个孔中加入500 μl含有1-2.5 x 105个细胞的无抗生素生长培养基。注意确保转染时细胞没有过度生长或处于休止期。 | | |
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B. DNA/GBfectene-Elite转染复合物的制备 | |
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1、将GBfectene-Elite转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀。
2、将100 μl DMEM或其他培养液（无血清和无抗生素）加入无菌试管中。
3、在上述含有DMEM培养液的试管中加入0.5 μg 或1 μg待转染的DNA质粒等，并充分混匀。随后在管子中加入经优化实验得到的GBfectene-Elite 最佳用量（见重要提示4），快速涡旋混合使其完全混匀。
4、室温静置10分钟，从而获得100 μl DNA/GBfectene-Elite 转染复合物（注：该转染复合物在室温下可保质1 小时）。 | | |
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1、在每个细胞培养孔不同部位逐滴加入100 μl DNA/GBfectene-Elite的转染复合物（由步骤B制备所得），轻轻前后晃动培养板使其混匀。
2、放置在37 ℃，5%CO2培养箱中培养。
3、转染24-48小时后，收集细胞，并按要求进行检测。 | | |
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图一：GBfectene-Elite转染试剂的操作流程 | |
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表一: 贴壁细胞或悬浮细胞接种数量、培养基体积 |
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| 培养器皿 |
每孔表面积(cm2) |
每孔相对面积 (vs. 96-孔板) |
每孔培养基的体积 (ml) |
贴壁细胞在转染前一天接种密度 |
悬浮细胞在转染
当天接种密度1 |
| 96-孔板 |
0.32 |
1X |
0.1 |
1 - 2x104 |
2 - 5x104 |
| 48-孔板 |
0.75 |
2.3X |
0.2 |
2 - 5x104 |
0.4 - 1x105 |
| 24-孔板 |
2 |
6.3X |
0.5 |
0.6 - 1.3x105 |
1 - 2.5x105 |
| 12-孔板 |
4 |
13X |
1 |
1.3 - 2.6x105 |
2 - 5x105 |
| 6-孔板 |
9.5 |
30X |
2 |
3 - 6x105 |
0.4 - 1x106 |
| 60 mm |
21 |
66X |
5 |
0.6 - 1.3x106 |
1 - 2.5x106 |
| 100 mm |
56 |
175X |
10 |
1.8 - 3.5x106 |
2 - 5x106 | |
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注1：贴壁细胞培养密度取决于培养器皿的表面积，而悬浮细胞的密度则由培养基体积决定，确保转染时细胞密度在70-80% |
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表二: 对常规和敏感细胞起始转染条件 |
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| 养器皿 |
每孔中培养基的体积 (ml) |
转染复合物中 DNA含量范围(µg) |
转染稀释液(无血清DMEM) 体积(µl) |
常规细胞每孔转染试剂用量范围 (µl)2 |
| 96-孔板 |
0.1 |
0.1 |
20 |
0.3 - 0.6 |
| 48-孔板 |
0.2 |
0.2 |
40 |
0.6 - 1.2 |
| 24-孔板 |
0.5 |
0.5-1 |
100 |
1.5 - 3.0 |
| 12-孔板 |
1 |
1-2 |
200 |
3.0 - 6.0 |
| 6-孔板 |
2 |
2-4 |
400 |
6.0 - 12 |
| 60 mm |
5 |
5-10 |
1000 |
15 - 30 |
| 100 mm |
10 |
10-20 |
2000 |
30 - 60 | |
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注2：GBfectene-Elite转染试剂的用量在此范围内优化 |
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表三: 使用 GBfectene-Elite成功进行细胞转染的范例 |
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| 细胞类型 |
24孔板接种密度 |
每孔培基体积 (ml) |
转染复合物中DNA含量 (μg) |
转染稀释液(无血清DMEM) 体积(µl) |
GBfectene-Elite用量范围(µl)3 |
| HEK293 293T |
1.3x105 |
0.5 |
0.5 |
100 |
2.0-3.0 |
| CHO-K1 |
0.9x105 |
0.5 |
0.5 |
100 |
1.5-2.5 |
| COS-7 |
1x105 |
0.5 |
0.5 |
100 |
1.5-2.5 |
| Hela |
0.9x105 |
0.5 |
0.5 |
100 |
1.5-2.0 |
| HepG2 |
0.9x105 |
0.5 |
1.0 |
100 |
2.0-3.0 |
| MCF-7 |
1.2x105 |
0.5 |
0.5 |
100 |
2.0-2.5 |
| NIH3T3 |
0.9x105 |
0.5 |
1.0 |
100 |
2.5-3.0 |
| RAW264.7 |
1.5x105 |
0.5 |
1.0 |
100 |
1.5-2.5 | |
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注3： 如果在转染后发现细胞毒性，减少GBfectene-Elite转染试剂的用量
| 编号 |
名称 |
规格 |
产品价格（RMB） |
| GB1001-750 |
GBfectene -Elite 转染试剂 |
0.75ml |
1700 |
| GB1001-1500 |
GBfectene -Elite 转染试剂 |
1.5ml |
2800 |
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