中国水稻所大规模利用直接PCR方法加快分子辅助育种的过程
分子标记辅助育种技术是在水稻、小麦、玉米、大豆、油菜等重要作物上,通过利用与目标性状紧密连锁的 DNA 分子标记对目标性状进行间接选择,以在早代就能够对目标基因的转移进行准确、稳定的选择,从而加速育种进程,提高育种效率,选育抗病、优质、高产的品种。
目前植物PCR分子标记检测需复杂的样品前处理步骤和核酸抽提步骤,需耗费大量的人力物力。为彻底解决这个问题,著名的生物技术公司Genebank Biosciences Inc开发了高效植物一步法直接PCR试剂,无需抽提植物DNA,即可进行高效的PCR反应。一个操作人员完成96个植物样品前处理仅需5-10min, 一天可轻松完成几千个样品的PCR检测,所需试剂成本低。该方法操作快,效率高,成本低,目前已在中国水稻所等著名研究机构广泛使用,成功用于大规模的分子标记辅助育种检测和转基因检测。
具体的实验流程如下:
1. 一步法样品前处理: 每棵苗收取一小片幼叶(5-10mg)到GEB 96孔板(每孔装有50-100ul DNA萃取液),硅胶膜封口, 75度放置15min,
或用自动研磨仪运行1-2min混匀后孵育.
2. PCR体系构建:每孔吸取1-2ul萃取液直接作为DNA模板,和GBI supermix一起加入PCR板
3. PCR扩增和检测
该方法优点:
1. 一步法直接PCR法可批量操作,速度快,省时省力,每人每天可轻松处理上千个植株样品
2. 无需核酸抽提和复杂样本前处理,节约时间,提高效率
3. 超强抗抑制Tag酶技术保证PCR高效率进行
4. 大大加快分子辅助育种进程,可用于普通PCR,多重PCR,定量PCR和基因芯片等应用
结合MultiNA全自动电泳系统,可实现PCR产物检测的完全自动化和精确分析
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