cDNA基因过表达慢病毒包装服务
一、慢病毒包装服务介绍：
我们采用第三代慢病毒载体系统（慢病毒载体信息），病毒颗粒包膜上嵌合了来自水泡口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus）的VSV-G蛋白，使病毒能感染更多种细胞（包括分裂、非分裂细胞、难以转染的细胞）、模式动物、活体实验，且表达更趋稳定。
慢病毒包装简要流程：
1、根据目的基因相关信息构建cDNA过表达重组慢病毒载体，提取和纯化成超纯纯化重组质粒；
2、使用重组载体和病毒包装质粒共转染293TN 细胞，培养48 -72小时左右，进行病毒包装和生产，收集病毒液；
3、纯化和浓缩病毒液；
4、病毒滴度测定、目的基因检定；
高度安全：
我们的慢病毒颗粒将生物安全性保证到了最大程度，其中HIV-1来源的pSIH系列shRNA慢病毒载体来源于能用于美国临床基因治疗的慢病毒， 专利号位美国Dr. J. G. Sodroski 的US patent #5,665,577 和 #5,981,276。
3 ΔLTR (ΔU3)
3’ LTR区域删除了U3，使其不再有启动/增强活性，成为自灭活（self-inactivating, SIN）载体，即整合到细胞基因组后，不会产生新的子代病毒，也降低了对周围基因的意外激活。
RSV/5’LTR （RSV杂交启动子-R/U5’长末端重复序列）
采用杂合型RSV的增强子/启动子-R/U5’长末端重复序列，这样病毒转录时不依赖tat的存在，去除了 HIV的tat基因表达，tat在HIV-1基因组复制和转录延伸过程中发挥重要作用。
慢病毒骨架设计
仅保留了三个HIV-1病毒包装、复制与转导必需基因（gag, pol, rev) ，因其缺乏HIV-1增强子启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出HIV RNA。
慢病毒颗粒中无HIV-1基因
因为HIV-1表达的包装质粒都缺乏包装信息，所以，慢病毒颗粒不具有复制能力。
假病毒颗粒
慢病毒颗粒实为假病毒颗粒，只表达目的基因。
水疱性口炎病毒(VSV)糖蛋白G包膜
限制慢病毒成为野生型的可能性。
慢病毒转染效率：
MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒数，通常MOI越高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。 对于分裂活跃的细胞，比如Hela、293细胞，MOI=1时，80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞，比如原代细胞，感染效率较低。我们建议通过比较不同MOI（比如0、1、5、10、50、100等），选择适合的MOI进行实验。
二、我们的服务优势：
客制化载体构建方案：
客制化载体构建方案包括根据目的基因特征, 以及要转染细胞的特征与客户需求，我们会为客户选择最合适的慢病毒载体、启动子、荧光标记或选择性抗性标记，插入目的基因使其过表达，客户也可以根据我们的载体信息自行挑选；同时又可以根据客户的需要，可在重组慢病毒载体中加入各种报告基因或标签（或进行改造），从而构建高质量的cDNA过表达慢病毒载体，请参见 cDNA过表达慢病毒载体构建服务。
多种慢病毒载体系统可供选择：
我们用于cDNA过表达的慢病毒载体至少有三十种以上可供客选择，根据参考文献以及目的应用，我们总能帮客户找到最合适实验目的的载体系统，而且每种慢病毒载体都具有相应的文献可追溯性（请参见 慢病毒载体信息）。
更合理、省心的服务流程：
我们会根据每个客户的情况，为客户独身定制相应的的服务流程，相比较而言，我们会根据客户的实验目的，查阅大量的文献以作参考；大规模包装之前，会先小试，再在细胞水平验证目的基因， 并且会跟客户确认，让技术服务更合理；客户只需要告诉我们目的序列信息和细胞信息，我们会完成所有的服务，最后也提供相应的数据和资料，让客户更省心。
标准服务流程如下，仅供参考：
慢病毒浓缩：
我们使用SBI公司的PEG-it不会积累细胞残片，避免了毒性和免疫反应，对包括ES细胞在内的所有靶细胞无毒。超速离心的过程中，也会浓缩其他杂质，如细胞碎片、膜片段、以及细胞培养基内的变性蛋白等。这些杂质对于病毒颗粒的后继操作是有害的，如降低细胞转染效率，对转染细胞的细胞毒性等，特别是当转染原代细胞的时候。同时应用于试验动物的时候，会引发免疫反应，因此在慢病毒的应用过程中，不但需要较高的滴度，较高的纯度也是很重要的。
慢病毒包装服务储存计划：
我们会为客户将定制好的慢病毒颗粒及载体做额外备份，免费储存一段时间。以免客户在后面的实验中发生意外而急需。如有需要，也可以更优惠的价格再次订购，详情请参见慢病毒包装服务储存计划。
技术力量：
我们的主要生产人员均为博士后或博士，我们生产人员常规包装的慢病毒包装颗粒滴度均在>10^9 IFUs/ml以上。
三、cDNA过表达慢病毒包装服务列表：
cDNA过表达慢病毒包装服务列表：
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编号 |
慢病毒产量 |
可提供慢病毒数量 |
工作日 |
|
P100001 |
>1*10^7 IFUs/ml（常规滴度） |
>1*10^ 7~8 IFUs/ml |
30 |
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P100002 |
>5*10^7 IFUs/ml（常规滴度） |
>5*10^ 7~8 IFUs/ml |
30 |
|
P100003 |
>1*10^8 IFUs/ml（高滴度） |
>1*10^ 8~9 IFUs/ml |
30 |
|
P100004 |
>2*10^8 IFUs/ml（高滴度） |
>2*10^ 8~9 IFUs/ml |
30 |
|
P100005 |
>4*10^8 IFUs/ml（高滴度） |
>4*10^ 8~9 IFUs/ml |
30 |
|
P100006 |
>1*10^9 IFUs/ml（超高滴度，体内实验、干细胞应用） |
>1*10^ 9~10 IFUs/ml |
30 |
说明：FIV来源的载体只能包装成常规滴度的慢病毒
对照慢病毒颗粒：
|
服务编号 |
对照慢病毒产量 |
可提供慢病毒数量 |
|
P100007 |
>1*10^7 IFUs/ml（常规滴度） |
>1*10^ 7~8 IFUs/ml |
|
P100008 |
>1*10^8 IFUs/ml（常规滴度） |
>1*10^ 8~9 IFUs/ml |
|
P100009 |
>1*10^9 IFUs/ml（超高滴度，体内实验、干细胞应用） |
>1*10^ 9~10 IFUs/ml |
*说明：用RNAi病毒颗粒请见shRNA慢病毒包装服务。
四、成功案例与参考文献：
成功案例：
参考文献：
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