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cDNA过表达慢病毒载体构建服务
cDNA过表达慢病毒载体构建
   
    我们采用的是美国进口第三代慢病毒载体用于cDNA过表达慢病毒载体构建(详情请参见慢病毒载体信息),相比较而言,我们的载体具有更多的优势:
1、 含多种组成型EF1a /MSCV /CMV/Ubc启动子,保证cDNA稳定高表达;
2、含T2A肽链、3 ΔLTR (ΔU3)、SV40多聚A加尾信号等多种优化过的优势元件,保证慢病毒载体能够效包装成病毒颗粒,并且整合到细胞基因组之后,实现高安全性、低免疫原性、稳定长效表达;
3、含多个MSC位点或LCS无连接酶克隆位点、多种报告基因及抗性基因,选择更灵活;
4、 使用无连接酶克隆载体能插入长达5Kb cDNA序列
5、载体信息具有可追溯性,每种载体都具有对应的国外参考文献及数据,便于文献发表;
 
组成型启动子:
 
启动子
表达水平
应用
CMV
常规用于绝大多数细胞系.像Hela细胞、HEK293细胞、HT1080细胞等
MCSV
造血干细胞、干细胞等
EF1
强启动子,用于绝大多数原代细胞、细胞株和干细胞等
PGK
强启动子,用于绝大多数原代细胞、细胞株和干细胞等
UbC
低和稳定表达, 用于绝大多数原代细胞、细胞株和干细胞等

 
多种优势元件:
3 ΔLTR (ΔU3)
3’ LTR区域删除了U3,使其不再有启动/增强活性,成为自灭活(self-inactivating, SIN)载体,即整合到细胞基因组后,不会产生新的子代病毒,也降低了对周围基因的意外激活。
 
copGFP
绿色荧光报告基因,与常用的EGFP类似,但荧光更亮。
 
pUC起始点
使质粒在 E.coli 中高密度拷贝并且保持稳定。
 
RSV/5’LTR RSV杂交启动子-R/U5’长末端重复序列)
让全长病毒在293前体细胞中高水平包装和转录表达。
 
CMV/5’LTR CMV杂交型启动子-R/U5长末端重复序列)
使慢病毒载体保持高水平转录和高效转录出含病毒包装必需功能元件(如Psi, RRE, and cPPT等)的转录本,当用病毒包装细胞系(如HEK 293细胞)包装病毒时也能表达病毒衣壳蛋白。
 
SV40起始点
使质粒在哺乳动物细胞中稳定复制。
 
SV40多聚A加尾信号
强制转录终止子,有效终止转录或者终止共转录过程,维持稳定态mRNA高水平表达。
 
LCS无连接酶克隆位点
不依赖多克隆位点,能将各种目的cDNA插入载体,不需要DNA链接酶,较常规方法可靠。
 
Kozak序列
优化转录启动与翻译效率。
 
HA标签
目标蛋白识别与纯化。
 
WPRE元件
增强CMV启动转录的稳定性。
 
说明:每种载体用的优势元件均有所不同
 
 
客制化服务方案:
 
  目前我们能够为客户提供包括cDNA钓取、慢病毒载体构建、测序、慢病毒生产等一站式服务。我们的服务将为客户最大限度地提高效率和节省时间,另外,我们的技术专家将为您的实验提供全程支持,如有疑问,请Email至yanggy@genechem.com.cn
  我们可为客户提供cDNA过表达慢病毒载体构建服务的个性化定制服务方案,包括根据目的基因特征、目的细胞特征与客户需求,我们会为客户选择最合适的慢病毒载体、启动子、荧光标记或选择性抗性标记,插入目的基因使其过表达,客户也可以根据我们的载体信息自行挑选;同时又可以根据客户的需要,可在重组慢病毒载体中加入各种报告基因或标签(或进行改造),从而构建cDNA过表达慢病毒载体。
  虽然我们有标准的客制化服务流程,同时我们也会根据客户需求,为每个客户度身定制各种cDNA慢病毒载体构建服务方案。如有需要,欢迎致电021-34512321咨询。
 
 
标准客制化服务流程:
 
 
 
cDNA过表达载体构建服务列表:
       
  我们可以根据客户需求构建各种浓度的超纯纯化cDNA过表达慢病毒载体,载体能被包装成cDNA过表达慢病毒颗粒;无内源性多聚A信号;对靶细胞无毒;从5 to 3 LTR序列大小大于8kb;采用无连接酶克隆系统,插入目的cDNA序列最大达5kb;可直接转染细胞,用于瞬时转染;也可以包装成病毒颗粒感染细胞,用于稳定长效表达。
 
超纯纯化标准:
              内毒素<10EU/mg质粒DNA
              RNA<0.2ug/mg
              基因组DNA<2ug/mg
              蛋白<3ug/mg
 
编号
cDNA过表达慢病毒载体构建
标准
工作日
C200001
10 μg
超纯纯化
10
C200002
20 μg
超纯纯化
10
C200003
40 μg
超纯纯化
10
 
 
 
 
 
 
 
成功案例:
 
 
 
参考文献:
   
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6、Parikh H., Carlsson E., Chutkow W. A., Johansson L. E., Storgaard H., Poulsen P., Saxena R., Ladd C., Schulze P. C., Mazzini M. J., Jensen C. B., Krook A., Björnholm M., Tornqvist H., Zierath J. R., Ridderstråle M., Altshuler D., Lee R. T. , Vaag A.,1,2 Groop L. C., and Mootha V. K. TXNIP Regulates Peripheral Glucose Metabolism in Humans. Plos Med. 4 (5): e158, 2007. (PDF) »
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