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稳定细胞株构建服务

稳定细胞株构建服务

一、稳定细胞株构建服务介绍
  建立体外培养稳定细胞株对许多研究者来说是件非常痛苦的事,主要是因为:  
1、耗时周期长(一般顺利的话,从转染到鉴定完成冻存细胞要2个月左右),中途一旦发生污染则前功尽弃,最后得不到单克隆也需要重新开始;
2、对细胞培养要求高,要保证细胞状态良好,尤其是保证无支原体污染,并能从单个细胞长成单克隆;
3、需要积累很多经验,才能高效一次成功筛选出整合率100%的单克隆,从而避免常见的单克隆不纯现象;
4、建立诱导表达稳定株更是许多研究人员的噩梦,花费半年时间试图建立一个诱导表达株,最后却无功而返是极为常见的事;
 
  慢病毒载体由于整合率高,是非常理想的稳定株构建工具,通过控制慢病毒颗粒的转染实验条件,理论上可以确保每个细胞只有单拷贝插入。同时,由于病毒载体是通过病毒重组酶将外源片段整合入染色体中,其整合特性和病毒自身整合特性非常相似,偏向于转录活跃区段,且整合后非常稳定,在传代100次后仍然保留在宿主基因组中。最重要的是整合几率和所有其它化学,物理转染方法比,增加5至6个数量级,使得稳定株构建不再成为实验研究的障碍。由于整合几率非常高,所以很容易获得混合稳定株。
 
  我们采用美国进口的第三代慢病毒载体系统(详见慢病毒载体构建服务),病毒颗粒包膜上嵌合了来自水泡口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus)的VSV-G蛋白,使病毒能感染更多种细胞(包括分裂、非分裂细胞、难以转染的细胞)、模式动物、活体实验,并且表达更趋稳定。
 
高度安全:
 
  我们的慢病毒颗粒将生物安全性保证到了最大程度,其中HIV-1来源的pSIH系列shRNA慢病毒载体来源于能用于美国临床基因治疗的慢病毒, 专利号位美国Dr. J. G. Sodroski 的US patent #5,665,577 和 #5,981,276。
 
3 ΔLTR (ΔU3)
  3’ LTR区域删除了U3,使其不再有启动/增强活性,成为自灭活(self-inactivating, SIN)载体,即整合到细胞基因组后,不会产生新的子代病毒,也降低了对周围基因的意外激活。
RSV/5’LTR RSV杂交启动子-R/U5’长末端重复序列)
  采用杂合型RSV的增强子/启动子-R/U5’长末端重复序列,这样病毒转录时不依赖tat的存在,去除了 HIV的tat基因表达。,tat在HIV-1基因组复制和转录延伸过程中发挥重要作用
慢病毒骨架设计
  仅保留了三个HIV-1病毒包装、复制与转导必需基因(gag, pol, rev) ,因其缺乏HIV­-1增强子启动子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出HIV RNA
慢病毒颗粒中无HIV-1基因
  因为HIV-1表达的包装质粒都缺乏包装信息,所以,慢病毒颗粒不具有复制能力
假病毒颗粒
  慢病毒颗粒实为假病毒颗粒,只表达目的基因
水疱性口炎病毒(VSV)糖蛋白G包膜
  限制慢病毒成为野生型的可能性
 
 
二、我们的服务优势
服务流程:

慢病毒包装服务储存计划:
  我们会为客户将定制好的慢病毒颗粒及载体做额外备份,免费储存一段时间。以免客户在后面的实验中发生意外而急需。如有需要,也可以更优惠的价格再次订购。详情请参见慢病毒包装服务储存计划。
 
技术力量:
  我们的主要生产人员均为博士后或博士,我们生产人员常规包装的慢病毒包装颗粒滴度均在>10^9 IFUs/ml以上。
三、稳定细胞株构建服务列表
稳定细胞株构建服务列表:
编号
稳定细胞株构建服务
可提供细胞数量
工作日
E200001
载体、慢病毒颗粒和稳定细胞株
>1*10^ 6~9 个/ml
30
 
 
 
说明:  
1、FIV来源的载体只能包装成常规滴度的慢病毒。
2、所表达片段确保对目的细胞无毒性或者不抑制细胞增殖。
3、稳定株构建服务需要的细胞必须确保无支原体,黑胶虫或者其它微生物,真菌污染。我们只接受ATCC和DSMZ来源的无污染的细胞,或者由本公司代购ATCC和DSMZ的细胞株,进行细胞株构建服务。


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