稳定细胞株构建服务
一、稳定细胞株构建服务介绍
建立体外培养稳定细胞株对许多研究者来说是件非常痛苦的事，主要是因为：
1、耗时周期长（一般顺利的话，从转染到鉴定完成冻存细胞要2个月左右），中途一旦发生污染则前功尽弃，最后得不到单克隆也需要重新开始；
2、对细胞培养要求高，要保证细胞状态良好，尤其是保证无支原体污染，并能从单个细胞长成单克隆；
3、需要积累很多经验，才能高效一次成功筛选出整合率100%的单克隆，从而避免常见的单克隆不纯现象；
4、建立诱导表达稳定株更是许多研究人员的噩梦，花费半年时间试图建立一个诱导表达株，最后却无功而返是极为常见的事；
慢病毒载体由于整合率高，是非常理想的稳定株构建工具，通过控制慢病毒颗粒的转染实验条件，理论上可以确保每个细胞只有单拷贝插入。同时，由于病毒载体是通过病毒重组酶将外源片段整合入染色体中，其整合特性和病毒自身整合特性非常相似，偏向于转录活跃区段，且整合后非常稳定，在传代100次后仍然保留在宿主基因组中。最重要的是整合几率和所有其它化学，物理转染方法比，增加5至6个数量级，使得稳定株构建不再成为实验研究的障碍。由于整合几率非常高，所以很容易获得混合稳定株。
我们采用美国进口的第三代慢病毒载体系统（详见慢病毒载体构建服务），病毒颗粒包膜上嵌合了来自水泡口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus）的VSV-G蛋白，使病毒能感染更多种细胞（包括分裂、非分裂细胞、难以转染的细胞）、模式动物、活体实验，并且表达更趋稳定。
高度安全：
我们的慢病毒颗粒将生物安全性保证到了最大程度，其中HIV-1来源的pSIH系列shRNA慢病毒载体来源于能用于美国临床基因治疗的慢病毒， 专利号位美国Dr. J. G. Sodroski 的US patent #5,665,577 和 #5,981,276。
3 ΔLTR (ΔU3)
3’ LTR区域删除了U3，使其不再有启动/增强活性，成为自灭活（self-inactivating, SIN）载体，即整合到细胞基因组后，不会产生新的子代病毒，也降低了对周围基因的意外激活。
RSV/5’LTR （RSV杂交启动子-R/U5’长末端重复序列）
采用杂合型RSV的增强子/启动子-R/U5’长末端重复序列，这样病毒转录时不依赖tat的存在，去除了 HIV的tat基因表达。，tat在HIV-1基因组复制和转录延伸过程中发挥重要作用
慢病毒骨架设计
仅保留了三个HIV-1病毒包装、复制与转导必需基因（gag, pol, rev) ，因其缺乏HIV-1增强子启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出HIV RNA
慢病毒颗粒中无HIV-1基因
因为HIV-1表达的包装质粒都缺乏包装信息，所以，慢病毒颗粒不具有复制能力
假病毒颗粒
慢病毒颗粒实为假病毒颗粒，只表达目的基因
水疱性口炎病毒(VSV)糖蛋白G包膜
限制慢病毒成为野生型的可能性
二、我们的服务优势
服务流程：
慢病毒包装服务储存计划：
我们会为客户将定制好的慢病毒颗粒及载体做额外备份，免费储存一段时间。以免客户在后面的实验中发生意外而急需。如有需要，也可以更优惠的价格再次订购。详情请参见慢病毒包装服务储存计划。
技术力量：
我们的主要生产人员均为博士后或博士，我们生产人员常规包装的慢病毒包装颗粒滴度均在>10^9 IFUs/ml以上。
三、稳定细胞株构建服务列表
稳定细胞株构建服务列表：
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编号 |
稳定细胞株构建服务 |
可提供细胞数量 |
工作日 |
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E200001 |
载体、慢病毒颗粒和稳定细胞株 |
>1*10^ 6~9 个/ml |
30 |
说明：
1、FIV来源的载体只能包装成常规滴度的慢病毒。
2、所表达片段确保对目的细胞无毒性或者不抑制细胞增殖。
3、稳定株构建服务需要的细胞必须确保无支原体，黑胶虫或者其它微生物，真菌污染。我们只接受ATCC和DSMZ来源的无污染的细胞，或者由本公司代购ATCC和DSMZ的细胞株，进行细胞株构建服务。 |
